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收到細胞后正確的操作方法
更新時間:2021-11-24   點擊次數(shù):2064次

我們在收到細胞后首先應(yīng)該對細胞進行細胞活化︰

檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于–70 °C,隔夜后,移到liq N2)。

然后需對凍細胞進行解凍

1、依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單zhi定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它zhi定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r,務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細胞適應(yīng)后,方進行所需之實驗。

2、FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對細胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單zhi定之血清種類培養(yǎng)之。

3、將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37 °C 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺。

4、依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取10 ml培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37 °C,5 % CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

5、對絕大多數(shù)細胞而言,1 % 以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍.細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。

極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO 者,則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37 °C,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

 

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